超净工作台在沉降菌测试中的应用

目的：建立洁净室（区）中沉降菌的测试标准操作规程，保证药品在规定洁净级别的区域内进行生产。

范围：适用于洁净室（区）的沉降菌的测试。

职责：质量管理部、QA检测员

内容：

1、测试方法

本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室(区)的洁净度。

2、仪器、设备、培养基

2.1培养皿：Φ90mm×15mm 培养皿

2.2培养基：营养琼脂培养基

2.3生化培养箱：必须定期对生化培养箱进行校验。

2.4自动台式灭菌器：使用时应严格按照仪器说明书操作。

3、测试条件

3.1温度和相对湿度：洁净室（区）的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应，温度控制在18℃～26℃，相对湿度控制在45%～65%为宜。

3.2压差：空气洁净度不同的洁净室（区）之间压差应≥10Pa。

4、测试状态：动态测试和静态测试。静态测试时，室内测试人员不得多于2人；动态测试时，现场人员数按《洁净区人员控制管理制度》中规定执行，记录中注明现场人员数量及测试点位置。

5、测试时间：对单向流，测试应在净化空气调节系统运行不少于10分钟后开始；对非单向流，测试应在净化空气调节系统运行不少于30分钟后开始。

6、采样点数量及布置

6.1最少采样点数目

6.2最少培养皿数

在满足最少测点数的同时，还宜满足最少培养皿数，见下表

6.3采样点布置类型

超净工作台的采样点” />

6.4采样点的位置

6.4.1一般布置在离地面0.8-1.5m之间或操作平台的高度，除受洁净室（区）的设备限制外，应在整个洁净室（区）均匀布置。

6.4.2每个采样点一般采样一次，也可以多于1次。

6.4.3布置采样点时，应避开回风口，测试人员应在采样口的下风侧。

7、培养基制备

7.1依据检测区域的取样点数，按照《培养基配制标准操作规程》制备适量的营养琼脂培养基。

7.2在超净工作台内，以无菌操作法将配制好的营养琼脂培养基以每皿约15ml的装量分装，待培养基凝固后移出洁净区。

7.3将制备的营养琼脂平皿倒置于生化培养箱内35℃培养48小时，确认无菌落数后使用。

7.4培养皿传进洁净室（区）测试前要进行表面消毒。

8、测试

8.1将已制备好的培养皿按采样点布置图逐个放置，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中。

8.2静态测试时，培养皿暴露时间为30min，动态测试时，培养皿暴露时间为不大于4h。

9、培养：取样结束后将平皿倒置于生化培养箱内35℃培养72小时，并以未采样的营养琼脂平皿作对照皿。

10、结果计算

10.1 用计数方法得出各个培养皿的菌落数。

10.1.1用肉眼对培养皿上所有的菌落直接计数、标记或在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大镜检查，有否遗漏。

10.1.2 培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。

10.2 每个测点的沉降菌平均菌落数的计算:

= 

式中：    —平均菌落数

M1—1号培养皿的菌落数

M2—2号培养皿的菌落数

Mn—n号培养皿的菌落数

n—培养皿的总数

11、结果评定

11.1 每个测点的沉降菌的平均菌落数必须低于所规定评定标准的界限。

11.2 在静态测试时，若某测点的沉降菌平均菌落数超过评定标准，则应重新采样两次，两次测试结果均合格才能判为符合。

11.3若测试结果超标时应及时与生产部门联系，对该区域进行消毒或其它处理，然后重新测试至合格。

11.4洁净区沉降菌控制标准

12、注意事项

12.1采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。

12.2应采取一切措施防止采样过程的污染和其他可能对样本的污染。

12.3测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。

13、检测频率：1次/3个月。

14、附录

附录《沉降菌测试记录》

15、历史修订记录和原因

附录

                   沉降菌测试记录

编码：SOP-ZL-HJ-006-01-R1

 沉降菌测试记录

                                             编码：SOP-ZL-HJ-006-01-R1

 沉降菌测试记录

                                             编码：SOP-ZL-HJ-006-01-R1